炭疽病由炭疽菌属使得，是世界各国最紧迫感的树种病状中之一，有强损害性、数据分布广、皮肤感染超范围大等显著特点。电学消毒剂仍是特定防冶炭疽病的其主要的手段，但误用引致副猪嗜血杆菌体抗药理作用、区域被污染的和肉制品人身安全防护等大问题。树种是本身抗真菌感染有机化合物的宝库，开发设计树种源消毒剂有选定 性强、对非对象菌物相比人身安全防护、干净等优质。

2024年11月烟台先进材料与绿色制造山东省实验室杨军丽钻研员拜谱生物在Postharvest Biology and Technology杂志上发表题为“Gypenoside GP5 effectively controls Colletotrichum gloeosporioides, an anthracnose fungus, by activating autophagy”文章。研究利用DIA蛋白质组学技术，揭示了绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬机制有效控制炭疽菌的机理，为防治炭疽病提供了新的思路。拜谱生物为该研究提供了DIA球蛋白组学技艺服务。

汉语副标题：绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬有效控制炭疽病真菌Colletotrichum gloeosporioides

刊物：Postharvest Biology and Technology

2025年影响力细胞因子：6.4

公布时期：2024年11月

大家机构：烟台先进材料与绿色制造山东省实验室

科学研究素材：绞股蓝皂苷GP5处理后的炭疽病真菌C. gloeosporioides

拜谱带来了技术应用：DIA蛋清组学

研发思维：

研发但是

GP5对炭疽菌的缓和能力

通过 菌丝生长期速率单位法测定化合物GP4-GP7对菌丝生长的抑制作用，结果显示GP4-GP7的EC50值分别为96.98、27.5、38.48和61.59 mg/L。其中，GP5表现出最强的抑制效果，在12.5 mg/L浓度下，其抑制效果显著优于其他化合物。当GP5浓度为25 mg/L时，对炭疽菌的抑制率接近50%。此外，GP5的抗真菌活性超过了常用的化学农药百菌清和植物源农药苦参碱（图1）。

图1 GP5名词解释结构的相拟性无机化合物对球孢梭菌菌丝生长期的损害

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

通过光学显微镜观察，发现在GP5浓度为EC50时，孢子萌发受到明显抑制；而在400 mg/L浓度下，孢子完全不萌发。培养8小时后，GP5处理组的孢子萌发率显著低于对照组。在400 mg/L浓度下，孢子芽管长度仅为11.11 μm，而对照组的芽管长度已达到92.70 μm。这表明GP5能够有效抑制炭疽菌孢子的萌发和芽管伸长（图2）。

图2 用EC50和400mg/L溶液浓度正确处理GP5后的孢子不断涌现和芽管总长

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024） 理论研究发现了，GP5会有效的压制apple、红提和番茄上的炭疽病斑映射。当GP5渗透压达到了500 mg/L时，apple、红提和番茄的炭疽病发生率特殊有效降低。在1000 mg/L渗透压下，GP5对apple、红提和番茄的炭疽病都会有特殊压生产制效果（图3）。

图3 GP5可治理和改善球孢梭菌对丰收果子的毒力

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

GP5整理后炭疽菌菌体变动问题

通过扫描机光学高倍显微镜（SEM）和散射智能光学显微镜观察（TEM）观察，发现GP5处理后的炭疽菌菌丝部分脱水，细胞壁结构发生变化（图4）。在400 mg/L浓度下，GP5处理的菌丝细胞壁粘附增强。TEM观察显示，GP5处理后，细胞内的线粒体结构变得模糊，线粒体嵴断裂，细胞器结构难以辨认，并且出现了自噬体和自溶酶体。这些结果表明，GP5通过诱导自噬导致细胞死亡，从而发挥抗菌作用。

图4 GP5操作后的电镜留意

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

通过荧光显微镜观察，发现GP5处理后的炭疽菌细胞中出现大量红色荧光，表明存在大量的酸性囊泡结构，如自噬体和溶酶体（图5）。这与之前的TEM观察结果一致，证实了GP5诱导的自噬现象。此外，GP5处理后，细胞内钙离子（Ca2+）浓度升高，进一步激活自噬系统。

图5 GP5冶疗后的AO染色的

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

通过JC-1染料法检测线粒体膜电位，发现GP5处理后，线粒体膜电位显著下降。随着GP5浓度的增加，红色荧光逐渐减弱，绿色荧光逐渐增强，表明GP5能够诱导线粒体膜损伤，破坏线粒体功能，进而触发线粒体自噬（图6）。

图6 内部内Ca2+盐浓度和线粒体膜电势差发展

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

核蛋白组学定性分析

通过DIA淀粉酶质组学技术应用，发现GP5处理后，炭疽菌中有271个蛋白质表达发生显著变化，其中214个上调，57个下调（图7）。GO功能分析显示，差异表达蛋白主要参与代谢过程和细胞过程。KEGG通路分析显示，差异表达蛋白主要富集在有机物质代谢、细胞氮化合物代谢和基因表达等途径。特别是，自噬相关蛋白Atg8的表达上调，进一步证实了GP5通过自噬途径发挥抗真菌作用。

图7 核营养物质组学结论

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

稿件总结ppt

研究发现绞股蓝皂苷GP5能够有效抑制炭疽菌的生长和致病性。通过体外实验，GP5显著抑制了炭疽菌菌丝的生长和孢子萌发，其效果优于常用的化学农药氯噻酮和植物源农药苦参碱。进一步的电镜观察和蛋白质组学分析显示，GP5通过激活自噬途径，诱导细胞内自噬体和自溶酶体的形成，从而导致炭疽菌细胞死亡。

图8 GP5抗击C. gloeosporioides的抗白色念珠菌原则。

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

拜谱个人总结

研究采用DIA蛋白酶组学，揭示了绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬机制有效控制炭疽菌的机理。这一发现不仅为防治炭疽病提供了新的思路，还展示了DIA蛋白组学在植物病理学研究中的强大应用潜力。拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，率先引进赛默飞最新一代质谱仪Astral，并且专家团队总结多年DIA蛋白组项目经验，结合Astral质谱仪高稳定性、高灵敏度、高通量、高深度的特性对样品制备、分离技术、算法软件、实验设计全流程进行多维迭代更新，助力蛋白组学检测。此外，拜谱生物还提供转录组学、当地翻译后体现组、细胞代谢组学以及几组学共同产品设备技术服务，欢迎致电咨询！

借鉴专著：

Liu Y, Li X, Gong C, et al. Gypenoside GP5 effectively controls Colletotrichum gloeosporioides, an anthracnose fungus, by activating autophagy[J]. Postharvest Biology and Technology, 2025, 220: 113305.